蛋白相較于核酸,因其承擔(dān)生物學(xué)功能,有“活性”特征,蛋白樣品的處理要求操作者有更好的經(jīng)驗(yàn)和技巧。拿蛋白濃縮這一常規(guī)操作來(lái)講,根據(jù)樣品規(guī)模(體積)、通量(樣品個(gè)數(shù))、混合物的復(fù)雜程度及相關(guān)設(shè)備配套要求,就分為鹽析、透析、凍干、分子篩色譜等等不同選擇。而超濾,不論從操作的簡(jiǎn)便性還是處理效率來(lái)說(shuō),都算優(yōu)勢(shì)突出,成為蛋白濃縮/除鹽/緩沖液置換等蛋白綜合處理的。掌握好超濾技巧,我們就能更好地保全蛋白活性和得率。針對(duì)于蛋白在超濾濃縮過(guò)程中容易發(fā)生沉淀這個(gè)現(xiàn)象,就超濾管的使用提出一些建議,供您靈活選用。
蛋白如果濃縮過(guò)快或者過(guò)度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。我們建議蛋白濃縮后的zui終濃度不超過(guò)20mg/ml。對(duì)于對(duì)濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白,我們建議的改進(jìn)方法是:
1)離心力降為推薦離心力的30%-50%;
2)改選擇截留分子量更大的過(guò)濾裝置(如原本選用10k,此時(shí)可以選擇30k);
3)在濃縮過(guò)程中取出超濾管,用槍頭反復(fù)吹吸幾次。
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