紫外分光光度計已經(jīng)是一種能解決廣泛難題的儀器,從單一波長的測量到高性能多光譜的測量分析。實驗室選擇時需要根據(jù)自己實驗室的需要和目的用途來考慮,光學(xué)構(gòu)造和光源、探測方法和數(shù)據(jù)處理等都是要考慮的因素。
光學(xué)構(gòu)造
一般來說,紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。顧名思義,單光束型主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物,然后再通過實際樣品溶液,就能得到吸光結(jié)果。
雙光束型則是將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實際樣品。可以小化光漂移和減少測量時間。因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。
光源和檢測方法
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員一般希望低價購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長情況。如果需要更大的靈活性,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,可以程序性地進行ELISAs分析和比色分析。
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長,通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧嶒灉?zhǔn)確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
為了測量吸光值,分光光度計通常使用光電倍增管和光敏二極管。光電倍增管提供快速的反應(yīng)時間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。光敏二極管的動態(tài)范圍可以在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。
數(shù)據(jù)管理
大部分單機型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器,通常與PC機一起聯(lián)用,同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。