通常情況下,對于常用的反相色譜柱出現(xiàn)了嚴重的柱效降低、分離度差時,可以試試按照以下流程來對色譜柱進行沖洗、再生:
1、20倍柱體積水:乙腈= 95%:5% (用于移除系統(tǒng)中緩沖鹽,可根據(jù)常用緩沖鹽濃度調(diào)整比例)
2、20倍柱體積 乙腈
3、5倍柱體積 異丙醇
4、20倍柱體積 正己烷
5、20倍柱體積 乙腈
6、20倍柱體積 水:乙腈=95%:5% (可與步驟1保持相同的比例)
7、用所需的流動相比例重新平衡色譜柱
關(guān)于色譜柱的沖洗再生,基本上都是個性化的,也有很多相關(guān)文章,每支色譜柱的實際情況都會有所不同,適的再生條件需要經(jīng)過實際摸索和調(diào)整。
在色譜柱沖洗時,很多實驗室習慣用沖洗時間來評價是不是達到我們想要的效果。例如某位師傅告訴你把這個柱子沖半個小時就可以了。嚴格來講色譜柱的沖洗應該使用沖洗的溶劑體積來評價沖洗效果,柱體積的計算公式如下:
例如一根4.6mm內(nèi)徑,150mm柱長的色譜柱柱體積為:
如果要用20倍柱體積的乙腈沖洗色譜柱就需要約34mL的乙腈,假設柱流量是1mL/min,那就要用乙腈沖洗34分鐘,當柱流量是1.5 mL/min時就需要用乙腈沖洗約23分鐘。
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